上海起發(fā)bioron 108725說明書

1、BIORON的一步WGA試劑盒由BIORON GmbH開發(fā)和生產(chǎn)，是DOP（退化寡核苷酸PCR）的改進(jìn)版，具有優(yōu)化的引物序列和BIORON*的SD聚合酶。這種酶結(jié)合了鏈置換能力和高達(dá)92°C的熱穩(wěn)定性。由于這些特點(diǎn)，可以將這種酶用于兩種擴(kuò)增無需額外移液或及時動手的步驟。該試劑盒包含從單細(xì)胞或低拷貝模板擴(kuò)增人類基因組DNA所需的一切。每個試劑盒包含一個2.5x MM（不含酶的主混合物）；10 U/µl SD聚合酶；人類基因組DNA作為陽性對照和PCR級水。
該擴(kuò)增基于多重置換反應(yīng)，結(jié)合專門設(shè)計(jì)的針對人類基因組DNA優(yōu)化的簡并引物。BIORON SD聚合酶能夠在合成新鏈的過程中替換先前的鏈。結(jié)合高達(dá)92°C的溫度穩(wěn)定性，全基因組擴(kuò)增分析中的兩個常見反應(yīng)步驟不需要額外的手動時間。這將污染和處理錯誤的風(fēng)險降低。
該試劑盒用于低拷貝數(shù)基因組DNA的可重復(fù)擴(kuò)增，在約2小時內(nèi)產(chǎn)生2-10µg產(chǎn)品。

2、在解凍和處理陽性對照品（PC、人類基因組DNA）和樣本時避免剪切力。
所需的額外材料
•PCR循環(huán)器
•適用于所用PCR循環(huán)器的低結(jié)合PCR管
•適用于PCR管的密封件或蓋子
•帶氣溶膠屏障的一次性低結(jié)合移液管頭
•可變?nèi)萘繂瓮ǖ酪埔汗?br/>•安全層流箱
•符合當(dāng)?shù)匾蟮陌踩O(shè)備

3.一步WGA套件的申請
•單細(xì)胞DNA分析
•下一代測序（NGS）
•SNP基因分型
•基于qPCR和PCR的突變檢測
•STR和RFLP分析
•陣列技術(shù)（比較基因組雜交）

4.儲存條件和穩(wěn)定性
試劑盒必須在-20°C下儲存，并在有效期前保持穩(wěn)定。
使用前將2.5x MM（主混合料）、陽性對照品和水解凍。將其保持在4°C，將SD聚合酶保持在-20°C，直到需要，并在冷卻架中運(yùn)輸。
請避免2.5x MM反應(yīng)緩沖液的額外凍融循環(huán)。如果需要少量反應(yīng)，2.5x MM的等分就足夠了。只有在遵守存儲條件的情況下，本手冊中規(guī)定的套件*性能保證才有效。

5.質(zhì)量控制
BIORON一步WGA試劑盒的性能在批次間進(jìn)行常規(guī)監(jiān)測。

6.反應(yīng)設(shè)置協(xié)議
開始前的重要注意事項(xiàng)：
該試劑盒用于擴(kuò)增已經(jīng)分離的人類基因組DNA。沒有包括提取系統(tǒng)。
樣本要求：
•來自1-100個細(xì)胞的基因組DNA（例如來自人類細(xì)胞的10-1000 pg DNA）
•分類染色體
•來自動物、植物或細(xì)菌的完整或片段化單鏈或雙鏈DNA
來源
•最大樣品體積14µl
•細(xì)胞染色產(chǎn)生的DNA可能會對試劑盒性能產(chǎn)生負(fù)面影響
•必須避免福爾馬林固定樣本中的DNA，以獲得最佳結(jié)果