karlan  PAF7413說(shuō)明書(shū)

產(chǎn)品詳細(xì)信息：檢測(cè)試劑盒： 檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品列表：auto PAF-AH
目錄編號(hào)：	PAF7413
產(chǎn)品名稱(chēng)：	auto PAF-AH
描述：	血清（血漿）血小板活化因子（PAF）乙酰水解酶測(cè)定法。該測(cè)定法采用分光光度法，不需要任何樣品預(yù)處理或使用任何放射性同位素。
數(shù)量：	每個(gè)（400個(gè)測(cè)試）
PDF檔案：	PAF7413.PDF

血清（血漿）血小板活化因子 (PAF) 乙酰水解酶測(cè)定

僅供研究使用。不得用于診斷或治療程序。

AZWELL 自動(dòng) PAF-AH

血清（血漿）血小板活化因子 (PAF) 乙酰水解酶測(cè)定

血小板活化因子 (PAF) 是由多種哺乳動(dòng)物 cel 型合成的具有生物活性的磷脂。它是過(guò)敏和炎癥反應(yīng)的介質(zhì)。PAF 被 PAF 乙酰水解酶 (PAF-AH) 轉(zhuǎn)化為無(wú)生物活性的 lyso-PA，后者催化酯化醋酸鹽在sn-2 位 PAF-AH 還降解與 PAF 結(jié)構(gòu)相似、與動(dòng)脈粥樣硬化密切相關(guān)的氧化磷脂。這些觀察結(jié)果表明，PAF-AH 在反應(yīng)性、炎癥性和動(dòng)脈粥樣硬化性疾病中起重要作用。在多種疾病中觀察到人血漿或血清 PAF-AH 活性的變化。AZWELL 自動(dòng) PAF-AH是一種準(zhǔn)確且方便的測(cè)定血清（血漿）PAF AH 活性的方法 [參考文獻(xiàn) 1]。

[試劑]

R1: 200 mmol/L HEPES 緩沖液，pH 值  7.6.

R2A: 20 mmol/L 檸檬酸一水合物緩沖液，pH 4.5。

R2B: 1-肉豆蔻酰基-2-（4-硝基苯基琥珀酰基）磷脂酰膽堿，90 mmol/L。

[申請(qǐng)]

用于測(cè)定血清或血漿中 PAF-AH 的活性

[含量測(cè)定方法]

1. 方法

分光光度法

2. 原理[參考 1]

PAF-AH 水解  sn-底物的 2 位（1-肉豆蔻酰基-2-（4-硝基苯琥珀酰基）磷脂酰膽堿），產(chǎn)生 4-硝基苯琥珀酸酯。該化合物在水溶液中立即降解并釋放 4-硝基苯酚。采用分光光度法監(jiān)測(cè)釋放，并通過(guò)吸收變化測(cè)定活性。

3. 特征

(1) 它不需要任何預(yù)處理  樣品。

(2) 不需要放射性同位素。

(3) 適用于自動(dòng)分析儀。

(4) 為液體產(chǎn)品（非凍干品），2-8 ℃ 可穩(wěn)定 11 個(gè)月

(5) R2 溶液制備后可持續(xù) 14 天。

(6) 該測(cè)定法在高達(dá) 1500 IU/L 時(shí)呈線性。

(7) 不受多種酯酶的影響。

(8) 不受血紅蛋白、膽紅素或乳糜微粒的影響。

使用該測(cè)定法和自動(dòng)分析儀，可以在數(shù)小時(shí)內(nèi)測(cè)量成千上萬(wàn)份樣本的活性。

[制備和程序]

1. 試劑制備

R1：使用提供的緩沖液。2–8 °C 下儲(chǔ)存。R2：使用前按 19:1 的比例混合 R2A 和 R2B（例如：R2A，19 mL + R2B，1 mL）。在 2–8 ℃ 下儲(chǔ)存。

小心！ 一旦 R2A 和 R2B 混合， 混合物 (R2) 必須在兩個(gè)

周。請(qǐng)勿長(zhǎng)期保存。

2. 測(cè)試程序

AZWELL 自動(dòng) PAF-AH預(yù)期用作試劑  基于上述原理的血清（血漿 PAF-AH 活性）測(cè)定。本試劑可與各種自動(dòng)分析儀配合使用。以下是 Hitachi 7170 型自動(dòng)分析儀的示例  (Hitach Ltd.,Tokyo,Japan)。使用試劑盒時(shí)，請(qǐng)閱讀并遵守儀器制造商的說(shuō)明手冊(cè)。

程序 1（用于自動(dòng)分析儀）

(1) 將下表參數(shù)輸入自動(dòng)分析儀程序后，自動(dòng)進(jìn)行下述分析程序。

測(cè)試樣品 (2<unk>L) + R1 (240<unk>L) <unk>37 °C,5 min [0–5 min] <unk> 加入 R2 (80<unk>L) <unk>37 °C,5 min [5–10 min] <unk> 測(cè)量吸光度 [6–8 min] <unk> 計(jì)算 PAF AH 活性

吸光度：405 nm 和 505 nm 之間的差異試劑空白：純化水或生理鹽水

 (2)  Hitachi 917 自動(dòng)分析儀參數(shù)

項(xiàng)目 輸入

測(cè)試 [PAF-AH]

試驗(yàn)代碼 [速率-A] [10] [21] [28] [0] [0]

波長(zhǎng)（次/主峰） [505] [405]

樣品體積 [2.0]

R1 體積 [240]

R3 體積 [80]

校準(zhǔn)

校準(zhǔn)方法 [線性]

標(biāo)準(zhǔn)

標(biāo)準(zhǔn)差（1）濃度-位置-體積 [0] [水 (99)][2.0]

K 因子

  確定您自己的 K 系數(shù)                       程序 2

(1) 2<unk>L 樣品和 240<unk>L R1 等份試樣為

混合，并在 37 ℃ 下預(yù)孵育 5 min。然后加入 80<unk>L R2 開(kāi)始反應(yīng)。加入 R2 后 1 和 3 min，在 405 和 505 nm（分別為主要和亞波長(zhǎng)）處測(cè)量吸收。將 2<unk>L 水等份試樣用作空白對(duì)照。

(2) 每分鐘吸光度的變化用于

采用樣品吸光度變化 (<unk>EA)、空白吸光度變化 (<unk>EB) 和 4-硝基苯酚消光系數(shù)之間的差異計(jì)算活性。

(3) 活性計(jì)算

PAF-AH 活性 (IU/L) = (<unk>EA–<unk>EB) <unk>V<unk>10⁶/(<unk><unk>sv<unk>d)，其中：

V：反應(yīng)混合液的終體積 (<unk>L)

10⁶：從摩爾到微摩爾的轉(zhuǎn)變

<unk><unk>4-硝基苯酚 sv 的消光系數(shù)：樣品體積 (<unk>L)

d：光路 (cm)

[樣本]

• 血漿或血清可作為樣本。采血后應(yīng)盡快測(cè)定樣本。
• 將樣品保存在 2–8 °C。如果儲(chǔ)存時(shí)間超過(guò) 24 小時(shí)，則冷凍樣品。請(qǐng)勿反復(fù)凍融。

[績(jī)效]

1. 靈敏度

(1) 試劑空白：小于 0.01 abs/min

(2) 靈敏度：0.02-0.06 abs/min，活性為 500 IU/L

2. 專(zhuān)屬性

預(yù)期含量值的 90-110%

3. 重現(xiàn)性

變異系數(shù)：小于 5%

4. 以下潛在干擾物質(zhì)幾乎不影響含量測(cè)定值。[參考 2]

(1) 血紅蛋白，高達(dá) 500 mg/100 mL

(2) 葡萄糖，上限 1000 mg/100 mL

(3) 尿酸，上限 50 mg/100 mL

(4) 尿素，高達(dá) 200 mg/100 mL

(5) 結(jié)合膽紅素，上限 20 mg/100 mL

(6) 游離膽紅素，上限 20 mg/100 mL

(7) 抗壞血酸，上限 50 mg/100 mL

[測(cè)量范圍][參考文獻(xiàn) 2] 10–1500 IU/L

[相關(guān)][ref 1] 樣本：人血清

N = 100

R = 0.979

y = 15.877x + 14.884

X 軸：放射性同位素檢測(cè)值

Y 軸：Azwell Auto PAF-AH 的值

[日本參考正常值]

低于 800 IU/L[參考 2]

[注意事項(xiàng)]

• 避免將試劑暴露于陽(yáng)光直射下。將試劑儲(chǔ)存在 2-8 ℃ 下。避免冷凍。請(qǐng)勿使用任何過(guò)期試劑。請(qǐng)勿混合任何不同批號(hào)的試劑。

2. 一旦制備 R2（R2A-R2B 混合物），將持續(xù)不超過(guò) 14 天。

3. 應(yīng)小心處理樣本以避免感染，因?yàn)闃颖究赡芎袀魅拘圆≡w，如 HBV、HCV 和 HIV。

• 用鹽水或水稀釋樣品，如果樣品活性超出測(cè)量范圍，則再次測(cè)量其活性。
• 凝血可能堵塞樣品探針。試驗(yàn)前除去任何可見(jiàn)凝塊。
• 樣品中的氣泡可能會(huì)影響數(shù)值，因此避免起泡。
• 請(qǐng)勿重復(fù)使用試劑瓶，請(qǐng)勿將制劑、供試品溶液和試劑用于本文所述以外的任何目的。

8. R2A 或 R2 溶液的 pH 值為 4.5。丟棄時(shí)請(qǐng)用大量水沖洗，或根據(jù)您所在機(jī)構(gòu)的規(guī)則或相關(guān)法律進(jìn)行丟棄。

• R2B 中涉及的溶劑為易燃液體（乙醇）。避免在靠近火源處使用。
• 避免接觸眼睛。如果發(fā)生這種情況，立即用大量水沖洗眼睛，然后去看醫(yī)生。

[儲(chǔ)存 ]

2–8 °C

[有效期]

11   月   之后 生產(chǎn)。   （失效日期   日期 i 在包裝上注明。）

[供應(yīng)體積]

R1: 60 mL ´ 2

R2A: 19 mL ´ 2

R2B: 2.2 mL ´ 1

[注]

僅供研究使用。不得用于診斷或治療程序。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Kosaka T.、Yamaguchi M.、Soda Y.、Kishimoto T. Tago A.、Toyosato M. 和 Mizuno K. (2000) A 分光光度法 含量測(cè)定 針對(duì) 血清 血小板活化因子乙酰水解酶活性。Clinica Chimica Acta 296,151-161.

[2] Azwell,Inc. 的內(nèi)部數(shù)據(jù)

[K 因子]

我們建議您使用自動(dòng)分析儀或分光光度計(jì)、4-硝基苯酚和試劑 R1 和 R2A（不含 R2B 底物）測(cè)定您自己的 K 因子或 <unk>（摩爾消光系數(shù)），以精確估計(jì) PAF-AH 活性。

標(biāo)準(zhǔn)分光光度計(jì)方案

如果您使用標(biāo)準(zhǔn)分光光度計(jì)進(jìn)行 PAF-AH 測(cè)定，請(qǐng)參閱以下程序。

程序

(1) 混合 2<unk>L 樣品和 240<unk>L R1 等份試樣，并在 37 ℃ 下預(yù)孵育 5 min。事件

然后加入 80<unk>L R2 開(kāi)始反應(yīng)。加入 R2 后 1 和 3 min，在 405 nm 處測(cè)定吸收。2<unk>L 水等份試樣也用作空白對(duì)照。

• 每分鐘吸光度的變化用于計(jì)算活性，使用樣品吸光度變化 (<unk>EA)、空白吸光度變化 (<unk>EB) 和 K 因子之間的差異。PAF-AH 活性 (IU/L) = (<unk>EA–<unk>EB) <unk>K

請(qǐng)確定您自己的 K 系數(shù)。您可以精確地制備自己的 4-硝基苯酚溶液，但是，您也可以使用以下設(shè)計(jì)用于設(shè)置 K 因子的市售試劑盒。

WAKO Chemicals，433-97501，K 因子校準(zhǔn)品 4-硝基苯酚 (5 mL x 4)。可從 Wako Chemicals USA,Inc. 獲得（www.wakousa。。ｃｏｍ)

如何計(jì)算 K 因子

(1) 測(cè)定對(duì)硝基苯酚溶液的濃度。（下表中的 Cs1、Cs2 和 Cs3）

• 使用空白溶液和 4-硝基苯酚溶液作為樣品進(jìn)行自己的測(cè)定，并測(cè)定各吸光度。      (n=5;      Ab,      Ab1,      Ab2,      和       Ab3       in       的       以下       表）   (在此檢測(cè)中，您必須使用 R2A 而非 R2。然而，當(dāng)您估計(jì)樣本時(shí)，請(qǐng)?jiān)跈z測(cè)中使用 R2。R2 表示 R2A-R2B 混合物比例為 19:1。）

(3) 計(jì)算 Ab、Ab1、Ab2 和 Ab3 的平均值。

(4) 空白校正（-空白）：分別從 Ab1、Ab2、Ab3 的平均值中減去 Ab 的平均值。

(5) 計(jì)算 Cs2 和 Cs3 的相對(duì)吸光度（空白校正后），其中 Cs1（空白校正后）視為 100。使用以下公式。

Cs2（或 Cs3）的相對(duì) Abs = [Cs1/Cs2（或 Cs3）] X [Cs2（或 Cs3）的 Abs/Cs1 的 Abs] X 100

(6) 計(jì)算 Cs1、Cs2 和 Cs3 的 K 系數(shù)

例如。Cs1 的 K 系數(shù) = [Cs1 濃度 (mmol/L)/空白校正后 Cs1 的平均 Abs] X 10⁷

(7) 確定 K 系數(shù)（上述 K 系數(shù)的平均值）

計(jì)算 Cs1、Cs2 和 Cs3 的平均 K 系數(shù)，并將其用作終 K 系數(shù)。但是，如果步驟 6 中計(jì)算的任何相對(duì)吸光度不在 100.0±3.0% 范圍內(nèi)，則從平均計(jì)算中排除該 K 系數(shù)，以獲得終 K 系數(shù)。

通常，K 系數(shù)必須為 11,000-13,000。（光路 = 1 cm，樣品：R1:R2

體積比 = 2:240:80）

示例

K = (11987+12188+12038)/3 = 12071