antibodies-online ABIN2014351說明書

MMAE Antibody Drug Conjugate (ADC) ELISA Kit

MMAE抗體藥物偶聯物（ADC）ELISA試劑盒

目標

MMAE抗體藥物偶聯物（ADC）

 

反應性

化學制品

 

檢測方法

比色法

方法類型

競爭ELISA

檢測范圍

0.0435-4000微克/毫升

檢測限

0.0435微克/毫升

應用

酶聯免疫吸附

目的

該測試試劑盒旨在定量測定測試樣品中的抗體-MMAE-綴合物水平。對于MMAE抗體藥物偶聯物（ADC）的臨床前和臨床藥理學研究非常有用。
該試劑盒可直接使用來自組織/細胞培養物的樣品以及來自人，大鼠，小鼠，靈長類動物等的血清樣品。-使用此試劑盒可測量基于人源化單克隆抗體的MMAE-ADC和基于小鼠單克隆抗體的MMAE-ADC成套工具。

牌

EDI™

樣品類型

組織樣本，血清

分析方法

定量的

交叉反應（詳細信息）

此MMAE-ADC EIA與MMAF-ADC，DM1-ADC和DUO-6-ADC沒有交叉反應。

組件

1.抗MMAE抗體包被的微孔板。一個微孔板，上面涂有十二乘八小條（總共96孔），并涂有特異性抗MMAE抗體。將板框起來并密封在帶有干燥劑的鋁箔拉鏈袋中。該試劑應在2-8°C下保存，并且在試劑盒上的有效期之前一直穩定。
2. HRP結合的MMAE。一個小瓶在穩定的蛋白質基質中包含3 mL即用型HRP標記的MMAE。該試劑應在2-8°C下保存，并且在試劑盒上的有效期之前一直穩定。
3. ELISA洗滌濃縮液。一瓶裝有3 mL 30倍濃縮液。使用前，內容物必須用87毫升軟化水稀釋并充分混合。稀釋后，產生一種工作洗滌溶液，其在磷酸鹽緩沖鹽水中包含表面活性劑以及非疊氮化物，非汞防腐劑。稀釋后的洗滌溶液可以在室溫下保存，并且在試劑盒上一直穩定到有效期。
4. ELISA HRP底物。一瓶裝有15 mL過氧化氫的四甲基聯苯胺（TMB）。該試劑應在2-8°C下保存，并且在試劑盒上的有效期之前一直穩定。
5. ELISA終止液。一瓶裝有15 mL終止液。該試劑可在2-8°C或室溫下保存，并且在試劑盒上的有效期之前一直穩定。
6.抗體-MMAE共軛零校準物。一個裝有30mL零校正劑的小瓶（30711）。該試劑用于稀釋校準儲備tmake分析校準物，以及稀釋測試樣品。該試劑應在2-8°C下保存，并且在試劑盒上的有效期之前一直穩定。
7.抗體-MMAE共軛校準液。試劑盒中未提供（可選）一個小瓶（3071 
2.在無凍干劑的凍干（0.5 mL）血清基基質中包含標準抗體-MMAE-綴合物的儲備液，請參閱該小瓶以獲取有關其準確濃度的信息。該試劑應在2-8°C下保存，并且在試劑盒上的有效期之前一直穩定。

不含材料

1.抗體-MMAE共混物
2.能夠輸送2μL，50μL，100μL等的精密單通道移液器
3.適用于上述體積分配的一次性移液器吸頭
4.鋁箔
5.去離子水或蒸餾水
6.塑料微量滴定器孔蓋或聚乙烯薄膜
7. ELISA多通道洗滌瓶或自動（半自動）洗滌系統
8.分光光度計酶標儀，能夠讀取450/650或450/2處的吸光度。納米

 

 

• 測定時間

  4小時

  盤子

  預涂

  協議

  此EIA試劑盒是為定量測定血清中的MMAE偶聯物而設計，開發和生產的。該測定利用競爭性免疫測定技術，該抗體具有僅與MMAE結合的抗體。測定校準物（抗體MMAE共軛物）和測試血清樣品直接添加到涂有特異性抗MMAE抗體的微量滴定板的孔中。隨后，將辣根過氧化物酶（HRP）共軛的MMAE添加到每個孔中。在溫育期間，抗體MMAE綴合物與HRP綴合的MMAE競爭抗MMAE抗體的有限結合位點。形成了包被良好的抗-MMAE抗體HRP綴合的MMAE的免疫復合物。未結合的抗體和緩沖液基質在隨后的洗滌步驟中被去除。為了檢測這種免疫復合物，然后在定時反應中將孔與底物溶液孵育，然后用酸性試劑（即ELISA終止溶液）終止反應。然后在分光光度計酶標儀中測量吸光度。結合到每個微量滴定孔壁上的免疫復合物的酶促活性與測試樣品中抗體-MMAE偶聯物的量成反比。通過在4參數或log-logit曲線擬合上繪制每個校準器的吸光度與相應抗體-MMAE共軛物濃度的關系來生成校準曲線。直接從該校準曲線確定測試樣品中抗體-MMAE綴合物的濃度。ELISA終止液）。然后在分光光度計酶標儀中測量吸光度。結合到每個微量滴定孔壁上的免疫復合物的酶促活性與測試樣品中抗體-MMAE偶聯物的量成反比。通過在4參數或log-logit曲線擬合上繪制每個校準器的吸光度與各自的抗體-MMAE綴合物濃度的關系來生成校準曲線。直接從該校準曲線確定測試樣品中抗體-MMAE綴合物的濃度。ELISA終止液）。然后在分光光度計酶標儀中測量吸光度。結合到每個微量滴定孔壁上的免疫復合物的酶促活性與測試樣品中抗體-MMAE偶聯物的量成反比。通過在4參數或log-logit曲線擬合上繪制每個校準器的吸光度與各自的抗體-MMAE綴合物濃度的關系來生成校準曲線。直接從該校準曲線確定測試樣品中抗體-MMAE綴合物的濃度。結合到每個微量滴定孔壁上的免疫復合物的酶促活性與測試樣品中抗體-MMAE偶聯物的量成反比。通過在4參數或log-logit曲線擬合上繪制每個校準器的吸光度與各自的抗體-MMAE綴合物濃度的關系來生成校準曲線。直接從該校準曲線確定測試樣品中抗體-MMAE綴合物的濃度。結合到每個微量滴定孔壁上的免疫復合物的酶促活性與測試樣品中抗體-MMAE偶聯物的量成反比。通過在4參數或log-logit曲線擬合上繪制每個校準器的吸光度與各自的抗體-MMAE綴合物濃度的關系來生成校準曲線。直接從該校準曲線確定測試樣品中抗體-MMAE綴合物的濃度。

  試劑準備

  （1）在使用前，讓所有試劑達到室溫。來自不同試劑盒批號的試劑不應合并或互換。
  （2）使用前必須將ELISA洗提液稀釋至工作溶液。有關詳細信息，請參見“試劑”部分。
  （3）使用EDI校準器：用0.5 mL去離子水重新配制校準液。稀釋重建的校準原液將足夠數量的抗MMAE抗體包被的微孔板放入支架中，以一式兩份確定校準物和未知樣品。

  檢驗程序

  （1）將100μL校準物和測試樣品添加到微孔中。
  （2）安全地密封板孔，用箔紙或其他材料遮蓋以防光照，然后在ELISA板振動器（小軌道半徑）上以400至450 rpm的轉速旋轉30分鐘。
  （3）立即向每個孔中加入25μLHRP共軛MMAE。（注意：添加HRP共軛MMAE之前無需執行洗滌步驟）
  （4）牢固密封板孔，用箔紙或其他材料遮蓋以防光照，然后在ELISA板振蕩器（小軌道半徑）上旋轉2個小時。400至450 rpm時10分鐘。
  （5）通過向每個孔中分配350μL的工作洗滌溶液，將每個孔洗滌5次，然后*吸出內容物。或者，可以使用自動微孔板清洗機。
  （6）將100μLELISA HRP底物添加到每個孔中。
  （7）用鋁箔或其他材料覆蓋板，以避免暴露在光線下。在室溫下靜置板靜置20分鐘。
  （8）立即將100μLELISA終止溶液添加到每個孔中。輕輕混合。
  （9）讀取450 nm處的吸光度。

  計算結果

  建議使用4參數或log-logit校準曲線擬合。
  1.計算每對重復測試結果對的平均吸光度
  2.校正曲線是通過所有校正劑水平在縱坐標上相對于校正劑濃度的校正吸光度生成的。應使用適當的計算機輔助數據縮減程序來計算結果。直接使用各自校正的吸光度從校準曲線中讀取測試樣品的抗體-MMAE綴合物濃度。

  測定精度

  通過在八次重復測定中測量三個校正劑（L3，L6和L8）來驗證測定內的精密度。CV％為7.1％，6.7％和11.0％。

  限制

  僅供研究使用

• 使用注意事項

  試劑必須在專業實驗室中使用。包含牛血清的試劑的原材料來自連續的48個美國。它僅從在獸醫監督下飼養的健康供體動物中獲得，并且沒有發現傳染性疾病。在進行此測定時，請戴上手套并處理這些試劑，就好像它們具有潛在的傳染性一樣。避免與含有TMB，過氧化氫或硫酸的試劑接觸。TMB可能會刺激皮膚和粘膜，并引起皮膚過敏反應。TMB是可疑的致癌物。硫酸與皮膚接觸可能會引起嚴重刺激。請勿進入眼睛，皮膚或衣服。不要攝入或吸入煙氣。接觸時，用大量水沖洗至少15分鐘。使用良好的實驗室規范。

  貯存

  4°攝氏度

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  目標

  MMAE抗體藥物偶聯物（ADC）

   

  目標類型

  抗體