貨號：P7050L

品名：DNA Polymerase I（DNA聚合酶I）

產(chǎn)品描述：

DNA聚合酶I是一種嗜溫性DNA聚合酶，除3'→5'和5'→3'核酸外切酶活性外，還具有5'-3'DNA合成。DNA合成和5'→3'核酸酶特征的組合使DNA合成期間的缺口翻譯成為可能。

蛋白質(zhì)來源

重組大腸桿菌菌株攜帶的POLA基因。

提供：

25 mM Tris-HCl
0.1 mM EDTA
1.0 mM DTT
50% glycerol
pH 7.4 @ 25°C

隨附：

pB0110 (10X Blue Buffer)

10X Blue Buffer (B0110)：
500 mM NaCl
100 mM Tris-HCl
100 mM MgCl2
10 mM DTT
pH 7.9 @ 25°C

單位定義 
1單位定義為在37℃30分鐘內(nèi)將10nmol dNTPs轉(zhuǎn)化為酸不溶性物質(zhì)所需的聚合酶量。

質(zhì)量控制分析

單位表征測定
單位活性使用2倍系列稀釋法測量。在1X Blue反應(yīng)緩沖液中制備酶的稀釋液，并加入含有小牛胸腺DNA，1X藍(lán)色反應(yīng)緩沖液，3H-dTTP和100μMdNTP的50μL反應(yīng)物中。將反應(yīng)在37℃孵育10分鐘，在冰上沉降，并使用TCA沉淀法分析。

蛋白質(zhì)濃度（OD 280）測量使用使用2.0mg / ml BSA樣品（Pierce Cat＃23209）標(biāo)準(zhǔn)化的Nanodrop ND-1000分光光度計(jì)

在OD 280處分析2.0μL酶樣品并用產(chǎn)品儲存溶液沖切。使用80,790的消光系數(shù)和103,118道爾頓的分子量將觀察到的3個(gè)重復(fù)樣品的平均測量值轉(zhuǎn)換成mg / mL。

SDS-Page（物理純度評估）
將2.0μL濃縮的酶溶液加載到變性的4-20％Tris-甘氨酸SDS-PAGE凝膠上，該凝膠側(cè)翼為寬范圍的MW標(biāo)記和2.0μL的樣品的1:100稀釋物。電泳后，將凝膠染色并比較??樣品以確定物理純度。該測試的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)要求濃縮樣品中污染帶的總量不超過稀釋樣品中目的蛋白質(zhì)條帶的質(zhì)量，確認(rèn)濃縮樣品的純度大于99％。

污染測試

單鏈核酸外切酶活性

將含有10,000cpm放射性標(biāo)記的單鏈DNA底物和10μL酶溶液的50μL反應(yīng)物在37℃下孵育4小時(shí)，導(dǎo)致TCA可溶性計(jì)數(shù)的釋放超過80％。

雙鏈核酸外切酶活性將含有5,000cpm放射性標(biāo)記的雙鏈DNA底物的50μL反應(yīng)液和10μL在37℃下孵育4小時(shí)的酶溶液導(dǎo)致超過50％的TCA可溶性計(jì)數(shù)的釋放。

雙鏈核酸內(nèi)切酶活性將含有0.5μgpBR322 DNA和10μL酶溶液的50μL反應(yīng)物在37℃下溫育4小時(shí)，結(jié)果通過瓊脂糖凝膠電泳確定沒有肉眼可察覺地轉(zhuǎn)化為帶切口的環(huán)狀DNA。

大腸桿菌  16S rDNA污染測試
重復(fù)5μL酶溶液樣品變性，并在TaqMan qPCR測定中篩選污染性 大腸桿菌  基因組DNA，使用對應(yīng)于16S rRNA基因座的寡核苷酸引物。測試的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)是由3個(gè)重復(fù)的無模板對照樣品的平均值產(chǎn)生的閾值循環(huán)計(jì)數(shù)（C t）。基于無模板對照 Ct  值與標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)之間的相關(guān)性，該測定的檢測限為<10拷貝基因組/樣品。

部分產(chǎn)品信息：

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